注意事项
- 操作时不能开通风，以免外界 RNA 酶污染。
- 裂解：PBS 重悬的外泌体中，加 1 mL TRIzol（☠️），立即涡旋，小离心机甩底
- 萃取：
- 加 200 μL 氯仿（☠️）（开盖用镊子，注意不要把盖子弄飞），立即振荡充分混匀
- 室温静置 5–10 min
- 12000 rpm，4°C，15 min（204 实验室）
- 吸取 RNA：在液面中间（不要贴壁）吸取水相（1 mL 枪头套 100 μL 枪头）。水平观察，保留 1 mm，避免吸到中间固相 DNA（不小心吸到的话，重新离心）。
- 沉淀 RNA：
- 加入同体积（约 500 μL）异丙醇，4 μL 助沉剂（外泌体）（出率高，如组织，则不用助沉剂），振荡，4°C（或冰上），15–60 min
- 12000 rpm，4°C，15 min
- 吸去上清（沉淀很小，不要吸到，一定要先找到再吸）
- 清洗：
- 加 1 mL 75% 乙醇洗掉之前的溶剂（轻轻加，不要冲散）（DEPC 水稀释无水乙醇）
- 7500 rpm，2min 晾干乙醇，加 15-20 μL 无酶水吹打重新溶解